一、目的：

本規(guī)程旨在為微生物實(shí)驗(yàn)室操作提供一個(gè)規(guī)范化規(guī)程；

二、適用范圍：

微生物實(shí)驗(yàn)室；

三、責(zé)任人：

實(shí)驗(yàn)室、微生物檢測(cè)員；

四、平安留意事項(xiàng)：

嚴(yán)厲遵照無(wú)菌操作，防止微生物污染;操作人員進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。

五、微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化操作規(guī)程：

1.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)有無(wú)菌操作間緩和沖間，無(wú)菌操作間潔凈度應(yīng)到達(dá)10000級(jí)，室內(nèi)溫度堅(jiān)持在20-24℃，濕度堅(jiān)持在45-60%，超凈臺(tái)潔凈度應(yīng)到達(dá)100級(jí)。

2.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)堅(jiān)持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。

3.嚴(yán)防一切滅菌器材和培育基污染，已污染者應(yīng)中止運(yùn)用。

4.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有任務(wù)濃度的消毒液(75％的酒精)。

5.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)活期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證微生物實(shí)驗(yàn)室的潔凈度契合要求。

6.需求帶入微生物實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過(guò)適宜的方法滅菌。

7.任務(wù)人員進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室前，必需用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間改換公用任務(wù)服，鞋，帽子，口罩和手套(用75%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室停止操作。

8.微生物實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用前必需翻開(kāi)微生物實(shí)驗(yàn)室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時(shí)翻開(kāi)超凈臺(tái)停止吹風(fēng)。操作終了，應(yīng)及時(shí)清算微生物實(shí)驗(yàn)室，再用紫外燈輻照滅菌30分鐘。

9.供試品在反省前，應(yīng)堅(jiān)持外包裝完整，不得開(kāi)啟，以防污染。反省前，用75%的酒精棉球消毒外表面。

10.每次操作進(jìn)程中，均應(yīng)做空白對(duì)照，以反省無(wú)菌操作的牢靠性。

11.吸取菌液時(shí)，必需用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。

12.接種針每次運(yùn)用前后，必需經(jīng)過(guò)火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培育物。

13.帶有菌液的吸管，試管，培育皿于高壓蒸汽滅菌鍋121℃堅(jiān)持20min后取出清洗。

14.如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立刻用75%酒精溶液覆在被污染處至少30分鐘，再做處置。任務(wù)衣帽等遭到菌液污染時(shí)，應(yīng)立刻脫去，高壓蒸汽滅菌后洗濯。

15.凡帶有活菌的物品，必需經(jīng)消毒后，才干在水龍頭下沖洗，嚴(yán)禁污染下水道。

16.微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)每月反省菌落數(shù)。在超凈任務(wù)臺(tái)開(kāi)啟的形狀下，取內(nèi)徑90mm的無(wú)菌培育皿若干，無(wú)菌操作區(qū)分注入消融并冷卻至約45℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培育基約15mL，放至凝結(jié)后，倒置于30-35℃培育箱培育48小時(shí)，證明無(wú)菌后，取平板3-5個(gè)，區(qū)分放置任務(wù)位置的左中右等處，開(kāi)蓋表露30分鐘后，倒置于30-35℃培育箱培育48小時(shí)，取出反省。100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超越1個(gè)菌落，10000級(jí)潔凈室平均不得超越3個(gè)菌落。如超越限制，應(yīng)對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室停止徹底消毒，直至重復(fù)反省契合要求為止。

如需了解2020年藥品 微生物、潔凈間、實(shí)驗(yàn)室、計(jì)算機(jī)、數(shù)據(jù)完整性、注冊(cè)等

器械 無(wú)菌檢驗(yàn)員、內(nèi)審、滅菌、廠房驗(yàn)證、管代、法規(guī)等課程和內(nèi)訓(xùn)均可聯(lián)絡(luò)。

食品類(lèi)微生物檢測(cè)：

食品類(lèi)微生物檢測(cè)詳細(xì)是指細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，包括細(xì)菌病毒總數(shù)、大腸桿菌和病原體的檢驗(yàn)。經(jīng)典的方法有固體細(xì)胞培育液法（用于細(xì)菌病毒總數(shù)的檢驗(yàn)），液體細(xì)胞培育液發(fā)酵法（用于大腸桿菌的檢驗(yàn)）效勞范圍：

各種食品類(lèi)，植物性、植物性原輔資料、消費(fèi)加工產(chǎn)品、半消費(fèi)加工產(chǎn)品，如糧食、油脂、調(diào)味料、肉食品、飲料、罐頭、餅干、糖果類(lèi)、酒水飲料、蔬菜、炒貨、食用添加劑、農(nóng)產(chǎn)品、兒童食品、豆制品、點(diǎn)心等。

菌落總數(shù)：

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè)菌落總數(shù)測(cè)定 GB 4789.2-2016.

大腸桿菌計(jì)數(shù)：

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè)大腸桿菌計(jì)數(shù) GB 4789.3-2016.

沙門(mén)氏菌：

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè)沙門(mén)氏菌檢測(cè) GB 4789.4-2016 （不測(cè)血細(xì)胞分型）。

志賀氏菌：

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè) 志賀氏菌檢測(cè) GB 4789.5-2012.

副溶血性弧菌：

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè)副溶血性弧菌檢測(cè) GB 4789.7-2013 （不測(cè)血細(xì)胞分型）。

金黃色葡萄球菌 :

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè)金黃色葡萄球菌檢測(cè) GB 4789.10-2016.

溶血性鏈球菌：

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè) β型溶血性鏈球菌檢測(cè)GB4789.11-2014.

蠟狀芽孢桿菌 :

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè) 蠟樣芽孢桿菌檢測(cè) GB 4789.14-2014.

霉菌和酵母計(jì)數(shù) :

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè) 霉菌和酵母計(jì)數(shù) GB 4789.15-2016.

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌 :

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢測(cè) GB 4789.30-2016.

乳酸菌 :

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則: 食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè)乳酸菌檢測(cè) GB 4789.35-2016.

大腸埃希氏菌計(jì)數(shù) :

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè) 大腸埃希氏菌計(jì)數(shù) GB 4789.38-2012.

大腸埃希氏菌O157:H7/NM :

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè)大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢測(cè) GB 4789.36-2016.

調(diào)料檢測(cè) :

食品衛(wèi)生平安微生物學(xué)檢測(cè) 調(diào)料檢測(cè) GB/T 4789.22-2003.

糖果、點(diǎn)心、果脯加工檢測(cè) :

食品衛(wèi)生平安微生物學(xué)檢測(cè) 糖果、點(diǎn)心、蜜餞檢測(cè) GB/T 4789.24-2003.

酒類(lèi)檢測(cè) :

食品衛(wèi)生平安微生物學(xué)檢測(cè) 酒類(lèi)檢測(cè) GB/T 4789.25-2003.

商業(yè)效勞無(wú)菌 :

食品衛(wèi)生平安規(guī)范規(guī)則:食品類(lèi)微生物學(xué)檢測(cè) 商業(yè)效勞無(wú)菌檢測(cè) GB 4789.26-2013 不做附則B異常狀況說(shuō)明。

一、什么是才干驗(yàn)證 實(shí)驗(yàn)室才干驗(yàn)證，深刻地講，就是評(píng)價(jià)一個(gè)實(shí)驗(yàn)室有無(wú)展開(kāi)某項(xiàng)檢驗(yàn)檢測(cè)活動(dòng)、出具合法有效的檢驗(yàn)檢測(cè)報(bào)告的才干。才干驗(yàn)證的目的是保證明驗(yàn)室的運(yùn)轉(zhuǎn)滿足質(zhì)量管理的要求，出具的結(jié)果公允公正、合法有效。 才干驗(yàn)證要從兩個(gè)方面來(lái)入手： *，硬件：能否具有與所要從事的檢驗(yàn)檢測(cè)活動(dòng)相婚配的場(chǎng)地、人員、設(shè)備。 第二，軟件：人員的才干能否滿足要求，實(shí)驗(yàn)室的管理運(yùn)轉(zhuǎn)能否滿足要求。

二、實(shí)驗(yàn)室收到盲樣菌株標(biāo)本后 1、操作前細(xì)心閱讀參指點(diǎn)書(shū)，尤其小的備注要留意，很多特殊狀況的處置大都在備注里。 2、樣品接納前的反省很重要，首先對(duì)樣品的完整性停止反省，對(duì)信息的閱讀要片面，假設(shè)發(fā)現(xiàn)樣品有效果及時(shí)溝通，這樣要比做樣品的時(shí)分在發(fā)現(xiàn)來(lái)的要及時(shí)，能節(jié)省不少的時(shí)間； 3、作業(yè)指點(diǎn)書(shū)的閱讀要到位，很多才干驗(yàn)證樣品寄到后要跟一份作業(yè)指點(diǎn)書(shū)，作業(yè)指點(diǎn)書(shū)中往往會(huì)對(duì)本次才干驗(yàn)證的樣品、成分、尺寸、選擇方法、樣品的結(jié)果記載、包括修約或樣品的粘貼、樣品寄發(fā)的留意事項(xiàng)等有明白的規(guī)則，熟讀這些對(duì)實(shí)驗(yàn)預(yù)備有很好的作用。比如有的會(huì)要求將實(shí)驗(yàn)后樣品一塊寄發(fā)組織單位，有的實(shí)驗(yàn)室假設(shè)不細(xì)心閱讀的話很容易將測(cè)試后樣品立刻處置掉，假設(shè)寄樣時(shí)在看見(jiàn)可就完了。 4、測(cè)試前的預(yù)備任務(wù)一定要做好，包括設(shè)備的校準(zhǔn)、試運(yùn)轉(zhuǎn)等，有條件的狀況下可以在正式測(cè)試前選擇一塊相仿的樣品停止一下預(yù)測(cè)試，這樣會(huì)將測(cè)試進(jìn)程中的效果提早發(fā)現(xiàn)提早處置。對(duì)正式測(cè)試的操作有協(xié)助。

三、才干驗(yàn)證樣品處置 1、樣品測(cè)試進(jìn)程中的判別才干很重要，有時(shí)分我們?cè)跍y(cè)試中往往會(huì)自以為是，為了保證測(cè)試進(jìn)程中的準(zhǔn)確操作*好是找一個(gè)閱歷豐厚的作督察，發(fā)現(xiàn)效果及時(shí)處置，假設(shè)等操作終了再發(fā)現(xiàn)效果的話能夠會(huì)由于樣品的消耗而無(wú)法驗(yàn)證結(jié)果； 2、定量項(xiàng)目，西林瓶?jī)?nèi)樣品不可聯(lián)系，應(yīng)全部用于檢測(cè)。普通參考書(shū)指點(diǎn)的是加40mL稀釋液制成40mL樣品。 3、定量項(xiàng)目樣品稀釋。指點(diǎn)書(shū)標(biāo)明了稀釋范圍的，在稀釋范圍左右各加1個(gè)稀釋度停止；書(shū)上沒(méi)有稀釋范圍的，多做稀釋倍數(shù)，選擇適宜的稀釋倍數(shù)計(jì)數(shù)（普通可稀釋至10-8）。 4、定量項(xiàng)目，除了要多做稀釋倍數(shù)外，同時(shí)同一稀釋度要多倒幾皿，從原理下去講，檢測(cè)進(jìn)程屬于隨機(jī)抽樣反省，平板越多，數(shù)據(jù)越接近真值。思索性?xún)r(jià)比，又不能夠不時(shí)瘋狂一個(gè)稀釋度很多平板，所以才干驗(yàn)證時(shí)分多倒幾皿，求好結(jié)果。 5、定性項(xiàng)目有一些重要步驟。 a、增菌及分別步驟尤其重要。選擇適宜的增菌液和分別用培育基對(duì)目的菌的檢出十分關(guān)鍵，選擇兩種以上的增菌液和分別用培育基對(duì)菌株作直接分別和增菌后分別。 b、劃線分別十分重要，要把增菌液中的目的菌盡量多的表達(dá)出來(lái)，要分出單個(gè)菌落并盡能夠多挑取可疑菌落，確保分別到目的菌。 c、生化實(shí)驗(yàn)和血清學(xué)實(shí)驗(yàn)以營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上的純培育細(xì)菌為好。

四、實(shí)驗(yàn)進(jìn)程一定要做陰陽(yáng)對(duì)照 陽(yáng)性對(duì)照，是在試知驗(yàn)中，檢驗(yàn)培育基和培育條件能否適宜，假設(shè)在實(shí)驗(yàn)中，陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)沒(méi)有生長(zhǎng)的話，那這個(gè)實(shí)驗(yàn)是失敗的。陰性對(duì)照主道要是檢測(cè)培育基能否污染，在沒(méi)有參與任何東西培育時(shí)，培育基培育后還是會(huì)顯示陽(yáng)性回結(jié)果，這就說(shuō)明培育基滅菌不徹底，染菌答了，這樣也會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的。

五、培育基方面需求留意的中央 1、培育基配制充沛混勻后再滅菌。 正確做法是用一局部水?dāng)嚢杵骄螅賲⑴c剩余水量，混勻后滅菌或分裝。 2、混菌法倒皿要充沛混勻。 培育基倒完要左5圈右5圈（混勻速度一定要慢，目的是——防止培育基動(dòng)搖到二皿接觸的縫隙局部形成后續(xù)污染），找較水平位置冷卻凝結(jié)。 3、培育基要不要掩蓋效果。 掩蓋的目的是為了阻止活菌在培育基表層經(jīng)過(guò)鞭毛移動(dòng)，形成片狀生長(zhǎng)，無(wú)法計(jì)數(shù)這一不利現(xiàn)象的發(fā)作。這里可以發(fā)揚(yáng)客觀能動(dòng)性-關(guān)于不運(yùn)動(dòng)的菌，可以不掩蓋，關(guān)于運(yùn)動(dòng)的菌掩蓋。 總結(jié)一下： a臨時(shí)檢測(cè)同一種樣品，不掩蓋并無(wú)蔓延現(xiàn)象，不掩蓋；臨時(shí)檢測(cè)蔓延選擇了掩蓋，不時(shí)掩蓋。 b未知樣品，停止掩蓋和不掩蓋的比對(duì)實(shí)驗(yàn)，然后決議以后異樣的樣品能否需求掩蓋。養(yǎng)成閱歷。 c才干驗(yàn)證明驗(yàn)，掩蓋和不掩蓋的都做，不要吝惜那么一點(diǎn)點(diǎn)培育基或耗材，畢竟才干驗(yàn)證明驗(yàn)做的美麗才是實(shí)驗(yàn)室（是室而不是人！）才干的綜合表現(xiàn)。 4、培育進(jìn)程防止平皿枯燥。 培育進(jìn)程中培育基可以倒的適當(dāng)厚一些，比如25mL。培育箱底部接一個(gè)不銹鋼盆，裝上足量無(wú)菌水。 5、 實(shí)驗(yàn)培育進(jìn)程勤觀察。 微生物培育進(jìn)程普通需求幾小時(shí)到幾十小時(shí)，要應(yīng)用這段時(shí)間觀察培育箱及菌生長(zhǎng)狀況，比如溫度能否動(dòng)搖，培育室內(nèi)濕度如何等等，多思多看，預(yù)備預(yù)案。方有能夠失掉與盲樣分歧的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 原始記載應(yīng)有條理、思緒明晰,完整準(zhǔn)確地記載菌株鑒定檢驗(yàn)的全進(jìn)程,原始記載要包括時(shí)間、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象、實(shí)驗(yàn)結(jié)果三個(gè)要素，方便實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)效果的查找。 結(jié)武判定 結(jié)果的判定普通依據(jù)設(shè)備操作，但是關(guān)于人為操作如評(píng)級(jí)、手工操作等結(jié)果能夠會(huì)由于人員的差異而會(huì)有不同的偏向，這樣在判定時(shí)*好是找有閱歷的部門(mén)擔(dān)任人或質(zhì)量專(zhuān)家一塊定奪，這樣的話會(huì)增加很多不用要的錯(cuò)誤。